T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A,这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端.基于这个原理,常规的线性T-克隆载体(PUC18和PUC19等)在其3’末端添加一个T,这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆,并不需要添加任何特异性的粘性末端位点.这个就是T克隆的原理了.
分析原因可能有: 1、T载体连接有问题,重新调整目的片段和T载体的比例,重新连接。 2、PCR某种试剂出问题了,以前有个师姐就是这样,怎么也扩不出来,让别人带样扩出来了,原来是Taq 酶出问题了,你也可以确定一下。
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