载体的末端是突出的t。如果直接是pcr产物，需要考虑，用taq酶扩增的片段可以直接连，如果是高保真酶扩增的片段，需要用taq酶加a尾，大约30min左右。
如果是已经经过酶切的片段，确实要补平加a。如果是这样，为什么不直接去连目标载体呢？
含粘性末端的目的片段能与T载体相连吗
关键是这个粘性末端带的是什么。因为T 载体的末端是突出的T。如果直接是PCR产物，需要考虑，用Taq酶扩增的片段可以直接连，如果是高保真酶扩增的片段，需要用Taq酶加A尾，大约30min左右。如果是已经经过酶切的片段，确实要补平加A。如果是这样，为什么不直接去连目标载体呢？
粘性末端连接问题
PEG 4000 1ul...10ul,4°过夜,转化TOP10片段是PCR扩增胶回收得到,载体和片段均用NcoI 酶切回收纯化,没有测浓度,但是有跑胶,亮度还行,载体是GN抗性的,片段是 tet 抗性,转化后我分别铺了tet 、tet+GN的板,都没有长,究竟是什么原因呢?附上我的电泳图,有哪位大侠能够指导一下?不甚感激。 展开 我来...
含粘性末端的目的片段能与T载体相连吗
分析原因可能有： 1、T载体连接有问题，重新调整目的片段和T载体的比例，重新连接。 2、PCR某种试剂出问题了，以前有个师姐就是这样，怎么也扩不出来，让别人带样扩出来了，原来是Taq 酶出问题了，你也可以确定一下。
直接合成具有粘性末端的目的片段能直接进行连接吗
需要，被切掉的部分同样带有粘性末端（因为粘性末端的碱基互补），会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法纯化，可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。胶回收纯化的好处是直观的判断酶切实验结果是否理想，是否酶切完全，胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段（包括完整的环状质粒和线性质粒...
请问:运载体被限制性内切酶切割下的片段会不会重新连接在运载体上?
要连接就必须要DNA连接酶，否则不可能。而且，只要有相同的黏性末端，都可以连接，包括原来的质粒
如何把21bp的片段连到载体上
1、21bp片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，产生匹配的粘性末端，可直接进行连接。2、21bp片段与载体经限制性内切酶切割后，产生平末端，也可直接进行连接。3、设计含有限制酶切位点的引物，在PCR过程中在21bp片段直接加上接头。
为什么用两种不同的限制酶切目的基因和运载体,就能防止运载体本身、基...
剩下的部分在连接酶作用下相同的粘性末端就会配对连接，同样载体也会继续连接成环，基因和载体连在一一起也有，而且首尾的顺序也有两种，连接体系跑电泳结果会有4个条带，至少是4种，而且就算那个连接后的片段大小符合你要求的那段纯化后也有一部分是不能表达的。哪四种就不用写了，你肯定知道的，不能...
现有一个克隆载体和一段DNA片段(可能是粘性末端或平末端)通过哪些方法...
T4连接酶。。。还有同源重组
为什么载体和DNA片段都要酶切?
不切出来粘性末端的话是没法进行连接的，所以载体和DNA片段都要酶切产生粘性末端，然后才能连在一起。
建立连接反应体系时需注意的问题
DNA片段的连接在基因操作过程中应用广泛。通常情况下利用T4DNALigase必须经过长达16小时才能完成连接反应,而且反应常常受到DNA末端结构等的影响。宝生物工程(大连)有限公司(TaKaRa)的DNA连接系统(TaKaRaDNALigationKitVer.2)由于其独特的反应液体系,可以将反应时间缩短至半个小时,且不受DNA结构等的影响,大...
