利用t载体对pcr产物进行克隆的原因如下：
T载体又叫T质粒载体,是指T4噬菌体DNA连接酶,作用是在有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接.
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
DNA水解酶相当于剪刀,剪断DNA,而T载体（DNA连接酶）就相当于针线.如果克隆时不用,就不能将DNA连接起来.
DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
利用t载体对pcr产物进行克隆实验过程：
器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面离心管架，台式离心机，干式恒温气浴。
试剂
T 载体，T4 DNA 连接酶，连接酶缓冲液，无菌dd Water
操作步骤
PCR产物与T载体直接连接：
（1） 事先将干式恒温仪（或冰盒里的水）温度设定在14~16°C。
（2） 取4个灭菌的200ul微量离心管，加入：（需要调整）
4ul 目的基因
1ul T载体
0.5ul T4 DNA连接酶（TAKARA, 350U/ul）
1ul 连接酶缓冲液10 x buffer
3.5 ul dd Water
总量10ul 体系
（3） 上述混合液轻轻震荡后再短暂离心，然后置于14°C干式恒温仪（或14°C水中）中保温过夜（12-16h）。
（4） 连接后的产物可以立即用来转化感受态细胞或置4°C冰箱备用。
