简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理

如题所述

T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A,这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端。基于这个原理,常规的线性T-克隆载体(PUC18和PUC19等)在其3’末端添加一个T,这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆,并不需要添加任何特异性的粘性末端位点。这个就是T克隆的原理了。
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第1个回答  2012-01-20
PCR产物末端都有A尾巴,与T-A克隆载体上的T互补连接到载体上

T载体克隆实验原理
T载体克隆实验的原理主要涉及重组质粒的构建、感受态细菌的制备以及β-半乳糖甘酶显色反应的选择法。首先,构建重组质粒是通过DNA连接酶,如T4噬菌体DNA连接酶或大肠杆菌DNA连接酶,将经过酶切的载体与外源DNA片段连接起来。T4噬菌体DNA连接酶可连接粘性末端和平末端,但平末端连接效率较低,通过调整酶浓度...

T载体克隆的实验原理
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体,载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样,pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对,在连接酶的催化下,就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中,形成含有目的片...

t载体连接原理
总的来说,T载体连接原理是一种基于DNA碱基互补配对和DNA连接酶催化的重组DNA技术。它在分子生物学实验中有着广泛的应用,可以用于基因克隆、基因表达、突变体筛选等方面。通过T载体连接,我们可以方便地将目的DNA片段插入到载体中,构建出符合实验需求的重组DNA分子。

从克隆载体上PCR出目的基因原理
克隆载体是环状双链DNA。PCR的原理:首先,当热变性,模板双链分开成两条单链模板 然后,两条引物分别结合上各自的模板 聚合酶,催化dNTP等进行引物延伸,成为两对长链模板,由于延伸的时间只够完成目的基因的长度,是不足以完成整个环状的延伸的。所以得到模板的互补链是有头有尾的。这是一个循环。再...

含粘性末端的目的片段能与T载体相连吗
T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A,这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端.基于这个原理,常规的线性T-克隆载体(PUC18和PUC19等)在其3’末端添加一个T,这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆,并不需要添加任何特异性的粘性末端...

为什么pcr产物可以直接连t载体
普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A,线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基,从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对,提高了PCR产物连接和克隆的效率。

TA克隆的具体原理是什么?
PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’-T突出末端的DNA片断才能通过T\/A配对进行连接。通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法,重组到T-载体中,通过序列测定清楚DNA序列。

什么是T-克隆载体和U-克隆载体?
在PCR反应中,emphasis:role=italicTaqemphasis酶通常会在延伸的PCR产物3′末端加上一个非配对的碱基A。根据这一特性研制出了一种线性质粒,其5′端各带一个不配对的碱基T。采用这样的质粒可将PCR产物以TA配对连接的方式直接进行克隆,即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体,它的出现使PCR产物...

克隆原理是什么?
克降是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组织后代的过程。科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克降,这门生物技术叫克隆技术,含义是无性繁殖。克隆技术在现代生物学中被称为“生物放大技术”。无性生殖是指未经两性生殖细胞结合的生殖方式或者自然的无性生殖方式。一个克隆就是一个多...

什么是t载体
t载体就是T-DNA,是一类可以重组到受体生物染色体上的载体,通常被应用于植物的基因重组过程中。由于PCR产物两侧3′端通常含单个脱氧腺苷酸(A),与T载体之间的A-T互补性可提高PCR产物克隆的效率。染色体(chromosome) 是真核细胞在有丝分裂或减数分裂时遗传物质存在的特定形式,是间期细胞染色质结构紧密...

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