第二轮PCR为何难以扩增,如何改善
问题太简单，不够详细。做第二轮PCR的话用第一轮PCR的产物稀释1000倍当作模板在去进行PCR 另外，建议你设计套式引物做NEST PCR，即设计第一对引物扩增500bp包含目的DNA的片段，第二对引物在这500bp的区域内设计400bp，这样的话二轮PCR的效率将会很高。
PCR实验最常见的9个问题及解决方案
条带大小与理论不符，可能由污染、模板或引物使用错误、基因亚型等引起。需使用全新的试剂和枪头，对工作台进行清洁，查看引物是否正确使用，确保模板正确，对研究的基因进行序列分析和BLAST研究。持续出现假性条带，可能由于起始退火温度太低或目的扩增产物和非目的产物的Tm值相差不大。尝试适当提高PCR温度或...
二次PCR的产物电泳图观察,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖...
非特异性扩增太多，建议稀释模板。提高退火温度，再试试。还有如果一次PCR产物也是如此，建议切胶回收与目的条带相近处的弥散带作为二次的模板。
融合PCR的操作原理及注意事项
1、戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。2、使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。3、避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
二次pcr还需要加引物吗
不需要。由于引物是特异性与模板结合，当一条DNA模板双链打开时，只消耗一对引物，因此只需在反应开始前将引物、模板一次性加入反应管中即可。
PCR产物回收后,作为再次PCR的模板,为什么不可以?我反复扩增几次都失败...
可以直接在PCR产物上加-A，体系是（PCR回收产物，Taq酶，水，dATP，Taq PCR buffer），直接72度延伸20min即可。如果你仍想继续以回收产物为模板，那么要先检测你的条带是否为目的基因或是否有回收到产物，如果是目的基因，那么用它做模板，浓度不需要太严格，你电泳检测一下再扩增试试。
二次PCR什么意思
就是觉得用已经反应完的pcr产物，用相同的引物重新进行扩增，得到跟多的产物。但是扩增时应注意体系，不然扩增产物的电泳图会出现严重的拖尾现象。
PCR产物作为模板继续PCR反应,稀释前后产物不同,怎么回事?
况且第一轮PCR的产物中会有很多不需要的组分，因此第一轮的产物通常都要进行稀释后作为第二轮的模板，稀释100倍是起步，另外你的PCR体系模板量太大了，10%的模板是很多的，会引入大量第一次PCR的杂质，一般加1~2微升即可。另外第二轮PCR通常设计的引物退火温度要大于第一轮比较好 ...
pcr需要注意的问题
酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度...
我想问做PCR扩增应该注意的事项?
PCR污染与对策：PCR扩增产物污染是PCR反应中最主要最常见的污染问题，所以，扩增区的仪器什么如枪头等要注意。还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而...
