为什么SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳中样品跑不进胶,

配胶的药品是阿拉丁的,没问题,配制方法也是正确的,但是电泳后染色脱色没有蛋白质条带,是什么原因

溴酚蓝指示剂跑进去没有,有没有在合适的位置?
染料配制的有无问题,最好找别的胶试一试。另外脱色液也很重要,加热(55度)脱色。
可以同时上一个预染Marker看一看。追问

我做电泳的药品大部分都是从阿拉丁上买的专做电泳用的,只有Tris试剂、盐酸、甘氨酸不是,Tris和甘氨酸都是分析纯的,盐酸是工业级的,按照实验书上的要求配的5%浓缩胶和15%分离胶,为什么跑不出蛋白条带呢?之前以为药品配的时间长了,这次新配的也跑不出,求指点,我都快急死了,最近一直做不出

追答

15%的分离胶浓度太大了吧,你要检测的蛋白质分子量是多少?我们一般用7.5%、10%、12.5%的分离胶,浓缩胶用4%的,分别用于检测分子量100以上、40以上和20KD以上的蛋白质。
预染marker买一个,好多生物公司都有现货的。
电泳缓冲液就是Tris-Gly,不要用盐酸的;盐酸用于配制两个不同pH的缓冲液。你的配方有无问题?灌胶后多长时间胶凝固?

温馨提示:内容为网友见解,仅供参考
第1个回答  2012-05-08
是不是电极插反了?跑胶时曹内有冒泡么?
PH值对么?
配电泳buffer的水要是超纯水
第2个回答  2012-05-04
样品里加SDS了吗?

sds聚丙烯酰胺凝胶电泳跑不到胶下部
1.看你的问题,应该是胶浓度太低了,所以是高分子量蛋白分出来,低分子量还没来得及分开胶就已经跑到头,跑出去了.去查查多少浓度的胶适合分多少KD的蛋白,把胶的浓度调高点,比如说15%或者12 2.介于你说你有一次跑出来了?你没有上图,我不能肯定你的试验结果,如果你确定浓度真的没问题,怀疑一下你的...

为什么我做聚丙烯酰胺凝胶电泳分析同工酶时条带跑不开?浓缩胶是5%的...
你的胶浓度太高了,所以会跑不动,一般浓缩胶用4.5%,分离胶用7.5%的,我最近也在做这个实验呢,祝你能有个好结果!!

聚丙烯酰氨凝胶电泳常见问题
处理样品时,根据目的不同,有还原SDS处理、非还原SDS处理和带有烷基化作用的还原SDS处理。还原SDS处理通过SDS和DTT解离蛋白,形成SDS-蛋白复合物;烷基化处理保护SH基团并防止银染时的纹理;非还原处理适用于无需测定分子量的样品。聚丙烯酰胺凝胶电泳中,丙烯酰胺作为载体,其聚合质量决定电泳效果。制胶缓冲...

sds聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳原理上有何不同
1、样品处理:在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,样品需要与SDS结合,形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物;在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,样品不需要与特定的化学物质结合。2、电泳驱动力:在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,带负电荷的蛋白质-SDS复合物在电场作用下向正极移动;在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,蛋白质通过其自身的电荷...

SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳中积层胶电泳速率太慢的原因有哪些呢?_百 ...
积层胶电压这么大?我觉得1.积层胶浓度大了2.蛋白体积大。积层胶时间如此之长,对电泳结果会造成影响的,而且胶的硬度也会变化。建议你到小木虫或丁香园提问,丁香园不错的,推荐。

SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是:_百 ...
答案是A 因为在SDS-PAGE电泳中,SDS(双亲分子)于蛋白质结合,使蛋白变性。SDS-蛋白复合物的形状成长棒状,拉平了蛋白形状的差异,排除D 。SDS带负电,一个蛋白上可以结合非常多的SDS分子,使得蛋白本身的带电可以忽略,排除C。缓冲液的PH是影响蛋白质分子的带电,在C被排除的情况下被排除。而对于A...

SDS-Page电泳,我配的胶总是不凝固
应该是pH有问题。如果pH不合适,即使加再多TEMED和过硫酸铵都不管用,即使凝了,跑胶也不顺利。

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳原理
因此,在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中,蛋白质复合物的迁移率不再受到原有电荷和分子形状的影响,仅取决于其长度。这就是SDS-PAGE的原理。SDS-PAGE具有很高的分辨率,常用于鉴定蛋白质分离样品的纯化程度。如果被鉴定的蛋白质样品非常纯,只含有一种具有三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具有...

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