基因文库法如何获取目的基因

如题所述

基因工程流程的第一步就是获得目的DNA片段,如何获得目的DNA片段就成为基因工程的关键问题.所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因.常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选
直接获取
1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了(基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取.利用λ噬菌体载体构建基因组文库的一般操作程序如下:① 选用特定限制性内切酶,DNA进行部分酶解,得到DNA限制性片段② 选用适当的限制性内切酶酶解λ噬菌体载体DNA.③ 经适当处理,将基因组DNA限制性片段与λ噬菌体载体进行体外重组.④ 利用体外包装系统将重组体包装成完整的颗粒.⑤ 以重组噬菌体颗粒侵染大肠杆菌,形成大量噬菌斑,从而形成含有整个DNA的重组DNA群体,即文库.
2.cDNA文库法(即原教材中提到的逆转录法).cDNA文库,是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体.虽然可用基因组文库法来获取真核生物的目的基因,但是由于高等真核生物基因组DNA文库比其cDNA文库大得多,相关工作量同样大得多.更为重要的是,在真核生物基因组中合有大量的间隔序列或内含子,但在大肠杆菌等原核生物中没有类似序列的存在,所以大肠杆菌不能从真核生物基因的初级转录本中去除间隔序列,即不能表达真核生物DNA.而在真核生物成熟mRNA中已不存在间隔序列(已在拼接过程中被去除),所以可以以真核生物成熟mRNA为模板,逆转录而成的cDNA可被大肠杆菌表达.因此,在基因工程中,cDNA文库法是从真核生物细胞中分离目的基因的常用方法.
3.直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”.这种方法有如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标,都能把鸟打下来.鸟枪法的具体做法是:用限制酶(即限制性内切酶)将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在受体细胞中大量复制(在遗传学中叫做扩增),从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法吧带有目的基因的DNA片段分离出来.如许多抗虫,抗病毒的基因都可以用上述方法获得.
用“鸟枪法”获取目的基因的优点是操作简便,缺点是工作量大,具有一定的盲目性.
人工合成
1.(主要是序列已知的基因).主要是通过DNA自动合成仪,通过固相亚磷酸酰胺法合成,具体过程可以网上查询,反正是可以按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列,一般适于分子较小而不易获得的基因.对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物,再利用引物获得目的基因.
2.聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术.它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研 究和检测鉴定.过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成.PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑
他只是给目的基因的扩增
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基因文库法如何获取目的基因
1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了(基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取.利用λ噬菌体载体构建基因组文库的一般操作程序如下:① 选用特定限制性内切酶,DNA进行部分酶解,得到DNA限制性片段② 选用适当的限制性内切酶酶解λ噬菌体载体DNA....

基因文库 从基因文库中提取基因
有了基因文库,获取目的基因可以通过下面三种方法.1.可以通过碱基序列人工合成,2.通过特定的限制性内切酶将目的基因剪切下来,3.可以用mRNA通过逆转录合成目的基因.为了筛选真核生物的某种基因,常从它的转录产物mRNA经反向转录(见中心法则)合成相应的互补DNA(cDNA),再加入用32P标记的核苷三磷酸,用DNA多...

如何提取目的基因?
1.从基因文库中获取目的基因(俗称:鸟枪法):将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌 的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库.当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因 在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋...

如何从基因文库中获取目的基因?
获得目的基因的方法:一、构建基因文库 提取总DNA。用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆(gene clone)将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库(gene library)。二、...

获取目的基因的常用方法是哪种
以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因;2、化学合成法:已知目的基因的核苷酸序列,可用合成仪直接合成;3、聚酶链式反应:已知目的基因引物的序列,将整个基因放入合成仪,因为只有当引物与模板结合后基因热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中间的目的基因被大量扩增,即被提取出来。

从基因文库中获取目的基因的根据是
根据就是基因文库是对某一物种基因组进行覆盖而构建的文库,文库一定包含所需的目的基因.方法是:1.从供体中制备高纯度的染色体基因组DNA;2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段;3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养;5.观察培养基...

基因组DNA文库要怎样分离目的基因?
基因文库的构建是目前基因工程的核心工作,也是分离目的基因的常用方法之一。首先,将某生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械方法切割成大小合适的片段,并将这些片段与适当的载体进行体外重组;再引入到相应的宿主细胞中繁殖和扩增,从而获得所有阳性菌落,从理论上讲,这些重组子应包含有整个基因组DNA...

如何从基因文库中找到所需要的基因
第一步,通过PCR方法将目的基因已知的部分核苷酸序列扩增出来,进行放射性同位素标记(也可以用别的标记方法进行,如生物素、荧光素等),即用标记了放射性同位素的目的DNA片段作为探针,与扩增出来的DNA杂交。第二步,将基因文库中的所有菌落转移至硝酸纤维膜上(也可以用其他类型的膜),然后,通过处理...

怎样从基因文库中找出目的基因
获取目的基因的方法是:1从基因文库中获得。目的基因片段的获取:目的基因的组成:一个能转录翻译的结构基因应包括转录启动区、核糖体识别区、编码区、和转录终止区。获得途径:1限制性内切酶酶切法2利用PCR技术直接扩增目的基因3目的基因的化学合成4通过构建基因组文库或CDNA文库分离目的基因5反向转录法分离...

目的基因的获取
蛋白质等的特异性的表现,与基因文库中的基因产物一致性找出文库中的目的基因。二、通过PCR扩增获取目的基因。关键是设计目的基因上游的引物,通过DNA复制,从引物开始延伸出引物后的DNA序列,从而得到你要的目的基因。3,我最近学的还有 化学法 是知道了核苷酸序列 用人工合成的方法得到 ...

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