PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾

PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因,结果照旧,重新合成了引物还是不行。同样的材料另外一对引物就能做出来。我都做了两个月了,大家帮帮忙吧~

“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”
说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题(特异性很差)。如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放。如果你没有好的设计软件,建议到Primer3去试试(目前最好的免费引物设计)。
如果还是不行,把序列发给我,我帮你设计(我有专业软件,ABI primer express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10)
温馨提示:内容为网友见解,仅供参考
第1个回答  2011-01-18
可能就是引物特异性的问题,到网上再重新设计一个吧
第2个回答  2011-01-18
看不懂废话毛

说明你的引物不是一般的差。第一步是提高退火温度试试,还是不行就只能按照一楼说的重新设计。
第3个回答  2011-01-18
引物设计问题,引物特意性差,3‘端gc比太高,或者有引物落入了串联重复序列中。建议做一下primer-blast看一下是什么问题,然后重新设计

...所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,求高手分析一下_百度...
非特异性扩增太多,建议稀释模板。提高退火温度,再试试。还有如果一次PCR产物也是如此,建议切胶回收与目的条带相近处的弥散带作为二次的模板。

PCR产物电泳时没有明显的条带,但有拖尾,maker无拖尾。反映体系如下...
你的PCR反应体系中没有加MgCl2吗?Mg2+在PCR反应中发挥了重要作用,Mg2+浓度越高,Taq酶活性越强,条带越亮,但非特异性也较强,杂带越多;Mg2+浓度过低则影响PCR扩增产量,甚至使PCR扩增失败而没有扩增条带。那个拖尾可能是引物二聚体

DNA琼脂糖凝胶电泳出现拖尾是什么原因?
电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度....

pcr产物琼脂糖凝胶电泳结果示什么都没有了,连溴酚蓝也没了
有几种可能 首先,胶的方向没放对,有可能从侧面或者后面跑出去了。你再跑电泳时要确定梳子孔的方向要与电流方向垂直。其次,电泳时间过长。可以缩短电泳时间,或者做浓度更高的胶,比如1.5%或者2%的胶。第三,还可能是你的琼脂糖有问题。

琼脂糖凝胶电泳拖尾了怎么办?
那琼脂糖凝胶电泳为什么会拖尾呢?1.PCR产物出现拖尾的因素有很多,总结为一条,就是非特异性扩增过多。原因可能是:(1)模板不纯:纯化模板 (2)Buffer不合适:更换Buffer (3)退火温度偏低:适当提高退火温度 (4)酶量过多:适量用酶,或调换另一种酶 (5)dNTP、Mg2+浓度偏高:适当降低dNTP...

PCR产物电泳,没有条带,但有拖尾,maker无拖尾
模板可能有降解,建议避免反复冻融,放置时间不能太长。抽提RNA时有污染,包括基因组DNA污染和蛋白质污染,需重做抽提。提高退火温度,减少非特异性扩增。减少循环次数,减少非特异性扩增。电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显改变。电泳时电压不能太高,8V\/cm。一般来讲,基于promega和TaKaRa的PCR...

这是我的pcr产物凝胶电泳图,哪位大神可以解答一下,为什么会出现前后拖 ...
出现拖尾是很正常的现象,毕竟基因组序列那么大,出现一些与引物部分序列互补的序列区间也是可能的,如果是其他的DNA作为模板,则有可能是你的模板不纯造成的,另外体系中有些物质,比如SDS也可能显示一些假带,造成判带困扰,所以你可以无视这种现象,只关心你的目的条带是否扩增出来即可 ...

琼脂糖凝胶电泳时,泳道很亮,但是没有明显的目的条带,呈明显的拖带现象...
可能原因:1.取样不够2.操作过程中机械损伤3.缓冲液加量不够4.凝胶未完全融化

PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么
1,可能是模板量过高,降低模板浓度10-1000倍;2,适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环(也就是在程序中多设置2步);3,稍降Mg离子浓度,如果以前加1.5ul的,试试1-1.2ul;如果以上方案还不能解决,就要检查你的模板、引物和...

pcr产物在电泳仪中跑胶出现拖尾现象是怎么回事
有一下几种可能性:PCR扩增产物浓度很高,overloading造成的拖带 模板量加太多了 引物或者模板的原因,条带扩增的时候带入了很多杂带

相似回答