PCR实验操作注意事项有哪些

如题所述

实验操作注意事项:尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
(1)戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。
(2)使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。
(3)避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(4)操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度。
(5)最后加入反应模板,加入后盖紧反应管。
(6)操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性。
(7)尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区。
(8)重复实验,验证结果,慎下结论。(搬运过来的)
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pcr实验中的注意事项
pcr实验中的注意事项如下:1、电子称的使用,要时刻注意保持电子称的精确性,保持清洁,根据不同的浓度的胶称琼脂糖。2、加TAE(化学试剂)的量要适当,以免配出来的胶太薄导致胶孔太浅或浓度太低。3、倒胶前胶托一定要洗干净,并擦干;倒胶时要待胶冷到一定温度摇匀尽量不要产生气泡。若胶液的温...

pcr实验注意的关键问题有哪些
PCR实验注意的关键问题有实验前的准备、引物设计、模板的质量和浓度、反应条件等。1、实验前的准备:PCR实验需要使用精密的仪器和试剂,因此实验前的准备工作非常重要。首先,要确保实验场地清洁、安全,并且符合实验要求。其次,要准备好所需的仪器和试剂,包括PCR仪、变性液、复性液、延伸液等,确保这些仪...

PCR的操作注意事项
(1)戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。(2)使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。(3)避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭...

PCR实验操作注意事项有哪些
1、必须在无菌无尘环境下进行操作;2、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;3、必须拥有标准的的PCR荧光实验室;4、后PCR区PCR完成以后,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。

PCR实验操作注意事项有哪些
1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室。2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求 荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件,构成PCR-DNA\/RNA实时荧光定量检测系统。3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证。4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;PCR实验室内工作人员必须...

PCR实验过程中的注意事项有哪些呢?
在进行PCR实验时,确保结果的准确性和稳定性,需要注意以下几个方面:首先,选择合适的样本类型和处理方法至关重要。一般临床检测标本需采用快速简便的方法溶解细胞,裂解病原体,消化除去染色体的蛋白质,使靶基因游离,直接用于PCR扩增。确保样本处理步骤的正确性,避免对PCR结果产生干扰。其次,实验过程中...

规范化的pcr实验室应注意哪些
⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间...

RT-PCR的注意事项是什么?
5.操作人员戴一次性口罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换.6.设置RNA操作专用实验室,所有器械等应为专用.二、常用的RNA酶抑制剂 1.焦磷酸二乙酯(DEPC):是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂.它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性.2.异硫氰酸胍:目前被认为是最...

动物源性荧光PCR检测过程中需注意的问题?
由于分子检测荧光探针法的灵敏度非常高,故在实验操作过程中,为防止样品交叉污染及扩增产物的污染,需注意以下事项:1. 严格取样。取样需要按照取样规程来,做到专物专用(如取样袋、剪刀等),禁止一物用在多个样品上。2. 分区操作。需把样品处理、配液分装、PCR扩增,这三个过程分开,在不同的区域的...

荧光定量PCR的注意事项,了解一下?
1.按照正确的开关机顺序操作,有助于延长仪器的使用寿命,减少仪器出故障的频率.开机顺序:先开电脑,待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机,等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件,进行实验.关机顺序:确认实验已经结束后,首先关闭信号收集软件,然后关掉定量PCR仪主机的电源,最后关闭电脑.2.应该...

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