pcr产物胶回收浓度低,能不能和T载体连接
可以，不过浓度太低的话会导致载体自连的比例增加，挑去单克隆后提取的质粒可能是空载的概率增加
PCR电泳胶切下以后去做TA克隆,胶回收以后至少需要多少的浓度才可以做...
浓度不是问题，关键是你要加入足够量的DNA。具体来说，载体与目的片段的摩尔比要为1比3到1比10。一般市场上的T载体大约是0.03pmol\/ul的浓度，也就是说你要加入0.06-0.3pmol的插入片段。对于1000bp左右的线性DNA分子，0.3pmol时的量约为200ng。目的片段浓度太低的话，你可以扩大连接体系来做。
DNA克隆,单菌落很多,检测不到目的条带,求高人指点
用的什么Taq酶？有些高保真的Taq酶不能再PCR产物末端加A，不适用于T载体。PCR产物回收后有跑胶鉴定吗？浓度如何，浓度太低的话，连接阳性率也很低的。另，能长出很多单菌落，说明你的板子、感受态都没有问题。
T载体连接问题
1、T载体连接有问题，重新调整目的片段和T载体的比例，重新连接。2、PCR某种试剂出问题了，以前有个师姐就是这样，怎么也扩不出来，让别人带样扩出来了，原来是Taq 酶出问题了，你也可以确定一下。
通过16srDNA鉴定细菌的疑惑
找到目的片段再进行切胶回收。溶液回收是不行的。3.基本流程就是这样的。DNA提取完了以后还是要跑胶检测的，测定DNA提取的效果和浓度。胶回收一定是找到目的片段的胶才能切胶回收，非目的片段的是没有用的。扩增不需要用高保真酶，TAQ酶会在产物末端直接加上A碱基，能直接和T载体连接，方便的很。
请教载体构建的问题!
5.连接体系是否正确。这步是最关键，也是最容易出错的一步。载体和目的片段的摩尔数比应为3：1到10：1之间。可以先通过跑胶确定两者浓度，再通过两者碱基数确定其需加的量。6.另外，还要确认载体抗性，转化时看有没涂错板子。希望我的回答可以为你提供帮助O(∩_∩)O~如果还不可以，再问吧~...
PCR扩增常见问题
在没有回收到目的片段的情况下，进行对照实验是必要的。通过涂布未转化的感受态细胞、转化完整质粒、使用pGEM-T载体进行连接等方法，可以检测载体是否存在问题或连接是否成功。结合具体的实验步骤，可以准确诊断问题所在并采取相应措施解决。综上所述，PCR扩增的各个环节都需精心设计和优化，以确保实验的成功。
请问PCR产物双酶切后跑电泳结果是怎样的,对PCR产物做这个有意义吗_百度...
一般根据经验切完之后，挖胶回收，如果产物带很特异的话，直接PCR产物回收也可以（方便），都可以达到纯化的目的，这也就是你说的意义了。碰到酶切效率不高的情况，我们会先把目的片段克隆到T载体上，然后再切T载体，跑胶回收。这样就可以清晰的看到被切下来的目的片段，麻烦一些，但是很确定。
加完a尾以后还用胶回收吗
加完a尾以后不用胶回收。加完a尾的产物可直接用于连接反应，不用再次清洁或者胶回收纯化。由外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带a尾的平末端DNA段，该平末端DNA段需要和T载体相连接，需要先利用Ta&DNApolymerase在平末端段后加上a尾后才能与T载体的T头互补连接。
PCR扩增的常见问题
如没有菌落或少有菌落,感受态细胞的转化率太低。C)如用pGEM-T正对照,或PCR产物,产生>20-40蓝斑(用指定步骤10(8次方)cfu\/ ug感受态细胞),表明载体失去T。可能是连接酶污染了核酸酶。T4DNA连接酶(M1801,M1804,M1794)质量标准好无核酸酶污染,不应用其它来源的T4 DNA连接酶替换。D)用pGEM-T或pGEM-T Easy...
