如何从基因文库中获取目的基因?

如题所述

可以利用基因工程技术来分离目的基因,大致步骤是:1.从供体中制备高纯度的染色体基因组DNA;2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段;3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养;5.观察培养基中的重组菌落或噬菌斑,筛选阳性克隆,再将其克隆中的目的基因提取分离出来即可。

参考资料:基因工程

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第1个回答  2011-04-08
PCR技术是DNA扩增技术,它能在比较短的时间内产生大量的DNA。在获取目的基因后才使用PCR技术。
获得目的基因的方法:
一、构建基因文库
提取总DNA。
用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆(gene clone)
将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库(gene library)。
二、反转录人工合成互补DNA
细胞核中转录的mRNA,已经加工去除内含子,只有外显子(编码蛋白质的序列),比构建基因文库优越,因此,先从细胞中提取所需的mRNA。
以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成互补的DNA片段(complementary DNA, cDNA),在逆转录完成时, mRNA被降解。在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下,再以第一条DNA为模板,合成另一条互补DNA链。
优点 在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA。因此,用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因。
第2个回答  2019-03-15
有了基因文库,获取目的基因可以通过下面三种方法.1.可以通过碱基序列人工合成,2.通过特定的限制性内切酶将目的基因剪切下来,3.可以用mRNA通过逆转录合成目的基因.
第3个回答  2019-08-22
对未知序列的基因测序,然后和cDNA文库对比,可以用一下生物信息学的专业网站NCBI,希望对你有帮助。
第4个回答  2020-02-18

如何从基因文库中获取目的基因

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