直接合成具有粘性末端的目的片段能直接进行连接吗
需要,被切掉的部分同样带有粘性末端(因为粘性末端的碱基互补),会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法纯化,可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。胶回收纯化的好处是直观的判断酶切实验结果是否理想,是否酶切完全,胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段(包括完整的环状质粒和线性质粒...
直接合成具有粘性末端的目的片段能直接进行连接吗
这得看你PCR扩增的时候用的是什么酶,一般rTaq酶扩增出来的片段都是粘性末端。但高保真Taq酶可以扩出平末端。你可以问卖试剂的人具体的rTaq酶名称。
直接合成具有粘性末端的目的片段能直接进行连接吗
平末端和粘性末端的链接都需要连接酶催化的,脱水缩合重新形成磷酸二酯键。其中E.coliDNA连接酶
含粘性末端的目的片段能与T载体相连吗
关键是这个粘性末端带的是什么。因为T 载体的末端是突出的T。如果直接是PCR产物,需要考虑,用Taq酶扩增的片段可以直接连,如果是高保真酶扩增的片段,需要用Taq酶加A尾,大约30min左右。如果是已经经过酶切的片段,确实要补平加A。如果是这样,为什么不直接去连目标载体呢?
含粘性末端的目的片段能与T载体相连吗
并不需要添加任何特异性的粘性末端位点.这个就是T克隆的原理了.分析原因可能有: 1、T载体连接有问题,重新调整目的片段和T载体的比例,重新连接。 2、PCR某种试剂出问题了,以前有个师姐就是这样,怎么也扩不出来,让别人带样扩出来了,原来是Taq 酶出问题了,你也可以确定一下。
粘性末端是不是不需要DNA连接酶也可以连接?
1、普通的限制酶的情况,这种情况下的粘性末端长度一般在4~6bp左右,这一类是最常见的也是最原始的。所以他们的连接是通过DNA连接酶将切割位点连接在一起的。这样的通常用于TA克隆,质粒构建等。2、这种情况比较少见,也是研究者利用特性改进的一种粘性末端的情况。即两条单链间有8~15bp的互补区域,...
只要有粘性末端和DNA合成酶及能量,DNA就能连接上吗?
必须有相同的黏性末端,另外需要的是DNA连接酶而不是DNA合成酶。
不同限制性内切酶处理的dna片段之间可以进行连接吗?为什么
不同限制性内切酶处理的DNA片段可以进行连接,这是因为限制性内切酶在DNA双链的骨架上特异性地切割,产生具有粘性末端的DNA片段,这些片段可以通过配对互补的粘性末端进行连接。不同限制性内切酶切割的DNA片段可能会产生不同的粘性末端,但是只要这些粘性末端是互补的,就可以通过连接酶将它们连接在一起。这种...
DNA连接酶体外连接
首先,具有互补粘性末端的片段可以通过DNA连接酶直接连接;其次,T4DNA连接酶可以处理平末端,通过末端脱氧核苷酸转移酶添加poly(dA)-poly(dT)尾巴,之后再由连接酶完成连接;最后,通过化学合成的衔接物或接头形成粘性末端,再利用DNA连接酶进行连接。DNA连接酶的特殊之处在于它能促进外源DNA和载体分子...
常用的目的基因与载体的连接方法有哪些
第一种方法是,用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;(人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。)第二种方法是,用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来,或是用末端...