什么是报告基因?

什么是报告基因? 不对称剪刀?

报告基因 (reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。

作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:(1)已被克隆和全序列已测定;(2)表达产物在受体细胞中不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;(3)其表达产物能进行定量测定。

在植物基因工程研究领域,已使用的报告基因有以下几种:胭脂碱合成酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基因(ocs)、新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、庆大霉素转移酶基因、葡萄糖苷酶基因、荧光酶基因等。nos、ocs这两个基因是致瘤土壤农杆菌(Agrobacterium tumfaciens)的Ti质粒特有的,对Ti质粒进行改造,用相应的致瘤农杆菌转化植物体时,如果外源基因转入植物体中,则这两种报告基因在植物根茎叶中均能表达,不受发育调控,检测时直接用转化体提取液进行纸电泳,染色后在紫外光下观察荧光即可。nptⅡ、cat及庆大霉素转移酶基因,均为抗生素筛选基因,相关的酶可以对底物进行修饰(磷酸化、乙酰化等),从而使这些抗生素失去对植物生长的抑制作用,使得含有这些抗性基因的转化体能在含这些抗生素的筛选培养基上正常生长,也可以用转化体提取液体,外用同位素标记,放射自显影筛选转化体。目前常用的一种报告基因是β-D-葡萄糖苷酶基因,该酶催化底物形成β-D-葡萄糖苷酸,它在植物体中几乎无背景,组织化学检测很稳定,可用分光光谱、荧光等进行检测。荧光酶基因(luc)是1985年从北美荧火虫和叩头虫cDNA文库中克隆出来的,该酶在有ATP、Mg2+、O2和荧光素存在下发出荧光,这样就可用转基因植物整株或部分直接用X-光片或专门仪器进行检测。

在动物基因表达调控的研究中,报告基因也被广泛应用。常用的有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶基因、二氢叶酸还原酶基因、荧光酶基因等。cat基因作为报告基因,检测时可通过放射自显影观察。荧光酶基因作为报告基因,具有检测速度快、灵敏度比cat基因高30~1000倍、费用低、不需使用放射性同位素等优点,得到了广泛的采用。

此外,在反式作用因子相互作用的检测方式枣酵母双杂交体系中,可通过报告基因的表达,研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用。双杂交体系是由报告基因转录调控区、报告基因及一对可以相互作用的杂合反式作用因子组成。近年来从上述杂交体系中发展出的单一杂交体系技术,也是根据报告基因表达量的检测筛选出与已知顺式作用元件相结合的未知因子的DNA,该项技术正广泛应用于克隆细胞中含量微弱且用生化手段难以纯化的反式作用因子。
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什么是报告基因检测法?
报告基因(reporter:gene)是指其编码产物能够被快速地测定的一类特殊用途的基因,常用来判断外源基因是否已经成功地导入受体细胞、组织或器官,并可以方便快速检测其表达活性。可见报告基因实质是起到了判断目的基因是否已经成功地导入到受体细胞并且表达的标记基因的作用。作为理想的植物报告基因应具备以下特征...

什么是报告基因?
报告基因 (reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。作为报告基因...

什么是标记基因和报告基因
什么是标记基因和报告基因 标记基因通常用来检验重组DNA载体转化成功与否,或者检测目的基因在植物细胞或组织中的定位。常用的标记基因是一些抗生素抗性基因,如卡那霉素抗性基因、潮霉素标记基因等。如:某种具有氨苄抗性基因质粒(该基因即可认为标记基因),与外源DNA片段组合形成重组质粒,并被转入受体细胞后,...

载体构建中常用的选择标记基因和报告基因是什么?
报告基因的主要作用是标记转化细胞,起报告和识别作用。常用的有Gus基因(β-葡萄糖苷酸酶基因),该基因来自大肠杆菌染色体上的uidA座位,编码β-葡萄糖苷酸酶。绝大多数植物不存在内源的Gus基因活性,因而Gus基因被广泛用作转基因植物的报告基因。常用的检测方法有组织化学染色定位法、荧光检测法和分光光...

真核生物表达载体关键序列有什么
启动子,转录终止子,转录因子结合位点,选择标记,报告基因。1、启动子:启动子是调控基因转录的区域,位于基因的上游。启动子的序列和类型对基因表达水平有很大影响。2、转录终止子:转录终止子是基因的下游,指示转录停止。3、转录因子结合位点:转录因子是一类蛋白质,可以结合到启动子和终止子的特定序列...

载体构建中常用的选择标记基因和报告基因是什么?
选择转化的细胞,进而使转化的细胞再生成为可育的转基因植株。目前多用特定的选择标记基因或报告基因。植物基因转化载体系统中均含有一个或多个标记基因,用于选择和筛选。标记基因编码一种不存在于正常植物细胞中的酶,较小,可用于嵌合基因构建,可在转化体中得到充分表达,易于检测,并可定量分析。

报告基因和标记基因的区别是什么?
据我了解的一个重要区别是报告基因的表达水平必须能够对某种条件作出不同反应,才能够给出此种参数是阴性是阳性是增加还是减少的答案。而标记基因只要持续稳定地表达,使得带有它的细胞被标记为此基因阳性即可。使用报告基因时,往往也需要标记基因,否则无法有效地区分真正的阴性与未成功转染细胞所呈现的假...

gus是什么
报告基因是一种可以表达并允许科学家检测其活动水平的基因。通过转基因技术,科学家们可以将GUS基因插入到研究对象的基因组中,以便观察和了解其他基因的功能或生物过程。例如,在植物生物学中,GUS基因的表达可以帮助研究人员了解特定基因在植物生长发育过程中的作用。此外,在病理学研究中,GUS也可能被用来...

什么是标记基因?
常用的报告基因有荧光素酶(emphasis:role=italiclucemphasis)、氯霉素乙酰转移酶(emphasis:role=italiccatemphasis)以及绿色荧光蛋白(emphasis:role=italicgfpemphasis)基因等。有时,标记基因本身就是目的基因,如除草剂抗性基因。另外,还包括转入的载体骨架,如启动子序列、T-DNA左右边界等。

什么是luciferase报告基因系统?
Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放...

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