蛋白质变性中用Tris-HC PH=6.8为什么

如题所述

Tris-HCl缓冲液的配制方法：

Tris：三羟甲基氨基甲烷

三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应
Tris为弱碱，在室温（25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。
Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。
由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。 用途：有机合成中间体。在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH值。在凝胶中也起到稳定PH的作用，只不过是Tris-HCl缓冲体系。
Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans核纤层蛋白lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。

1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)
组份浓度 1 M Tris-HCl 配制量 1L 配制方法：
1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
pH值 浓HCl 7.4 约70 ml 7.6 约60 ml 8.0 约42ml
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度 1.5 MTris-HCl 配制量 1 L 配制方法
1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.用浓HCl调节pH值至8.8。 4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
TE即Tris-EDTA buffer（10mM Tris，1mM EDTA，pH7.4 pH7.6 pH8.0）。
常用分子生物学试剂，用于DNA的溶解等。 配制1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)
组份浓度： 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 配制量： 1 L 配制方法：
1. 量取下列溶液，置于l L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0) 100 ml 500 mM EDTA(pH8.0) 20 ml
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4.室温保存。

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