电泳实验中什么叫上样缓冲液?

WESTERN BLOT 中需要进行电泳,其具体的各个缓冲液的作用是什么尤其是上样缓冲液

缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应(4OH--4e->2H2O+O2),负极发生的是还原反应(4H++4e->2H2),长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,是溶液两极的pH保持基本不变。

电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。

电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等离子,防止电泳时激活 DNA酶,此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。

TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。

TBE的特点是缓冲能力强,长时间电泳时可选用TBE,并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用,并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低,所以不宜在回收电泳中使用。

TPE的缓冲能力也较强,但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出,所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。
温馨提示:内容为网友见解,仅供参考
第1个回答  2009-01-27
楼上的博士啊,人家用的是蛋白上样缓冲液,不是核酸电泳缓冲液。

PAGE分离蛋白所用缓冲液一般使用Tris,溴酚蓝以及甘油;也可使用TBE,加入溴酚蓝和甘油。 还可加入少量DTT和巯基乙醇。
作用主要是标记和指示电泳程度,还有给试样染色,便于加样。本回答被提问者采纳
第2个回答  2009-01-27
①在电泳中形成肉眼可见的指示带,可测电泳的速度和位置。
②使样品呈色,使加样操作更方便。
第3个回答  2009-01-28
染色标记用的
第4个回答  2009-01-27
http://www.shinegene.org.cn/tools/sg045.pdf
这是一个pdf文档的链接,其中详细讲解了你所关心的问题,希望能够对你有所帮助。

电泳实验中什么叫上样缓冲液
loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6kb的缓冲液中可以显示两条带,前面的紫蓝色的条带是溴酚蓝,在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同。后面的蓝色条带是二甲苯氰,它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时,其迁移...

电泳实验中什么叫上样缓冲液
蛋白电泳上样缓冲液包括2%SDS , 0.1%溴酚蓝 10%甘油,SDS是保证样品中的所有蛋白带电荷一致,减少电荷对电泳结果的影响。还原剂是让二硫键处于断开状态,保证蛋白分子的线性.溴酚蓝作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的,甘油是增加上样重量的,以免漂浮,煮沸是使蛋白变性的永久保存 ...

loading buffer成分及作用
loading buffer,中文名上样缓冲液,是电泳实验中不可或缺的组成部分。它在6*缓冲液中的作用显著,通过两种指示剂——溴酚蓝和二甲苯氰FF,分别指示电泳进程。溴酚蓝在不同琼脂糖浓度下,对应不同大小的DNA片段(如1Kb、0.6Kb等),而二甲苯氰FF则对应于2Kb和1.6Kb的双链DNA。甘油则能提升样品...

电泳缓冲液和上样缓冲液的区别
2、上样缓冲液:上样缓冲液是用于将样品混合并加载到电泳凝胶或毛细管中的溶液。其主要功能是提供样品的体积和重量,以便在电泳过程中样品能够均匀地进入凝胶或毛细管。上样缓冲液通常包含一些添加剂,如甘油、甲醛、染料以及缓冲剂,以保持样品的稳定性和可视化。

SDS-page电泳缓冲液,样品缓冲液,分离胶缓冲液的区别
电泳缓冲液是Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样缓冲液是SDS缓冲液,需要加入Tris-Hcl,DTT,SDS,溴酚蓝和甘油。分离胶配制过程中的缓冲液是PH8.8的Tris-Hcl 浓缩胶配制过程中的缓冲液是PH6.8的Tris-Hcl

电泳缓冲液和上样缓冲液的区别
成分不同、作用不同。1、成分不同:电泳缓冲液通常包含Tris、EDTA、磷酸盐,上样缓冲液通常包含溴酚蓝和其他染料以及甘油等添加剂。2、作用不同:电泳缓冲液是在电泳过程中用于提供离子传导性和维持恒定pH值的溶液,使样品能够在凝胶和毛细管中移动。

DNA限制酶切和琼脂糖凝胶电泳中常说的Marker是什么?还有Loading Dye 在...
loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带,前面的蓝色的条带是溴酚蓝,代表的片段大小是 300bp,后面的有点绿色的条带是二甲苯青,代表的片段大小在4000bp左右。 loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,...

酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳上样加的缓冲液是什么?
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Buffer是什么意思?
首先,Loading Buffer,也就是上样缓冲液,主要用于样本在电泳或其他类似技术中的装载,以保护和稳定样本的pH环境。其次,Binding Buffer,也称为结合缓冲液,它在蛋白质或核酸等生物大分子的结合实验中起着关键作用,确保反应在适宜的pH条件下进行。再者,Elution Buffer,即洗脱缓冲液,主要用于在洗脱过程...

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