如何在平末端PCR产物末端加A
只有Taq酶可以在pcr产物末端加上A，可以与T载体连接。你不如用限制酶切，比如Fnu4HI，酶切位点GCN\/GC，N随便改都行。╮(╯▽╰)╭这么简单就告诉你了，好便宜你……
PCR产物怎么做TA克隆
1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A（一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min）,然后和普通PCR产物一样进行TA克隆；2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T...
平末端DNA加A尾的一些问题~高手请进~(*^__^*)
1 一般不需要，你可以比对你用的高保真酶的buffer和Taq酶的buffer，要加也只能加差异的部分，如果直接加buffer里面离子浓度肯定都不对了；2 都可以，不过我觉得还是应该在充分延伸后暂停或重新换程序；3 TA克隆成功说明加A成功；如果要做阳性对照就用Taq酶直接PCR一管；4 一定要纯化，不然里面全是A，...
简述TA连接的原理及其中PCR产物3撇端带A的原因
TA原理就是在做PCR的过程中，DNA聚合酶（Taq酶）在扩增完之后的3'末端总会多加一个带A的核苷酸，形成仅一个突出A的粘性末端PCR产物。TA连接的原理就是: 扩出来带A的PCR片段与商品化的T载体进行连接。T 载体就是只有一个T核苷酸突出碱基的载体（目前T载体都已经商品化，只需购买就行了），这样单个...
关于平末端DNA加A的一些问题~
是一个人的问题么。。。你这个平末端DNA是怎么得到？如果是PCR得到的话就表示用的酶带有外切酶活性，如果不回收一下的话再加A还是会被切掉的 如果是直接拿到的一个平末端DNA片段那就可以用第二种方法了 不过还是要加buffer，就相当于做一次PCR，不过只要最后的延伸那步而已 鉴别加A成功就是连T载体了...
PCR纯化产物为什么能直接连接,什么情况下直接连接?求高手指教。_百度知 ...
PCR纯化产物直接连接通常分为两种情况，一是TA连接，如phusion,高保真的taq，PCR后会有一个A末端，和T载体的T末端互补相连。另一是平末端连接，如pfu，PCR后是平末端，可以和blunt II vector这一类的载体直接相连，但顺序是随机的，可能是正的，也可能是反的。
测序的接头和作用
我的理解：简单来说就是提取基因组DNA后，用超声波打断或酶切打断，然后跑胶得到300-500bp的小片段，因为打断是随机打断的，可能有粘性末端，所以用酶来形成平末端，再在平末端后面加上A碱基得到粘性末端，在加上adapter，加到flowcell上，进行几轮的PCR扩增，就得到了测序文库（当然，这其中还包括了...
加完a尾以后还用胶回收吗
加完a尾以后不用胶回收。加完a尾的产物可直接用于连接反应，不用再次清洁或者胶回收纯化。由外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带a尾的平末端DNA段，该平末端DNA段需要和T载体相连接，需要先利用Ta&DNApolymerase在平末端段后加上a尾后才能与T载体的T头互补连接。
DNA切胶回收后怎么加上A尾巴做TA克隆?希望大侠们帮帮忙!
博凌科为-为你解答：PCR产物在48小时内其两端的A不会有显著损失。如果时间过长，如半月后建议重新做扩增。若在两周内，可以大胆尝试，只要片段不是很长，一般为3000bp。若时间过于长久，可以选择平末端载体进行克隆。
外源性基因与载体的连接方式有哪些
首先是T,A连接,就是现在通常使用的T载体,一般的PCR产物都在两端加个A,这样T,A相配,T4连接酶可以把他们连在一起.第二,粘性酶切位点连接,把载体和外源基因用相同的酶进行酶切（双酶切,或者单酶切都可以）回收相应的片段,用酶切出来的粘性末端进行配对,T4连接酶进行连接.第三,平末端连接,也是用酶...
