聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP),N,N,N’,N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。
由于SDS PAGE可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度,因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度;
如果被鉴定的蛋白质样品很纯,只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质,那么 SDS—PAGE后,就只出现一条蛋白质区带。
生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。
如果把生物大分子的胶体溶液放在一个没有干扰的电场中,使颗粒具有恒定迁移速率的驱动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E。它们与介质的摩擦阻力f抗衡。在自由溶液中这种抗衡服从Stokes定律。
在电泳开始前,样品与载体电解质有清晰的界面。电泳开始后,带电粒子向另一极(正极)移动,泳动速度最快的离子走在最前面,其他离子依电极速度快慢顺序排列,形成不同的区带。
只有第一个区带的界面是清晰的,达到完全分离,其中含有电泳速度最快的离子,其他大部分区带重叠。
参考资料来源:百度百科--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
聚合时丙烯酰胺分子通过加成反应形成长链,双体的作用是在长链之间形成交联,成为具有三维网状结构的凝胶。所以在凝胶电泳中除了具有电泳的分离外还具有分子筛作用,从而增高了它的分辨能力。
聚合时,根据分离的需要,可以用改变单体溶液浓度或增减双体比例的办法制成孔度大小不同的凝胶。在分离血清蛋白时,我们采用的丙烯酰胺总浓度为6.5%,内含单体96%,双体4.5%(T一6.5,c一4%)。聚合物分子中含有很多酰胺基,所以凝胶具有良好的亲水性,能在水中溶胀但不溶解。
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扩展资料:
SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构.而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂.在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链。
解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白-SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的蛋白量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,于连续缓冲系统相比,能够有较高的分辨率。
浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。
当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成一稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。
参考资料来源:/baike.baidu.com/item/%E8%81%9A%E4%B8%99%E7%83%AF%E9%85%B0%E6%B0%A8%E5%87%9D%E8%83%B6%E7%94%B5%E6%B3%B3/1840994"target="_blank"title="百度百科-聚丙烯酰氨凝胶电泳">百度百科-聚丙烯酰氨凝胶电泳
sds-page凝胶电泳原理
SDS-PAGE凝胶电泳,即十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,其原理主要基于带电物质在电场中的迁移行为。在电泳过程中,蛋白质或多肽的迁移率主要取决于其分子量大小,而非电荷或形状。这是因为SDS作为一种阴离子表面活性剂,能够打破蛋白质或多肽的形状和电荷差异,使它们呈线性化状态,并与SDS形成复合物。...
sds- page是什么原理?
原理:将蛋白质溶液与SDS(十二烷基硫酸钠)混合,SDS为界面活性剂会破坏蛋白质的二级结构使其变性,并包覆变性蛋白质,使其带有一致的负电荷(大约每两个氨基酸一个SDS)和一致的形状(长条形)。如果没有SDS使其负电荷一致,可能会使有相近分子量的蛋白质。分布于不同的位置,此种电泳法为原态胶体电...
sds-page凝胶电泳原理
SDS-PAGE凝胶电泳原理是聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺在催化剂过硫酸铵,N,N,N’,N’四甲基乙二胺作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。SDS-PAGE凝胶电泳技术首先在1967年由Shapiro建立,其原理:聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂...
sds-page凝胶电泳原理是什么?
SDS-PAGE凝胶电泳原理 SDS-PAGE凝胶电泳,即十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,是一种常用于蛋白质研究的电泳技术。其原理主要包含以下几个方面:一、SDS的作用 SDS是一种阴离子去污剂,它能够使蛋白质变性,帮助打破蛋白质的折叠结构,使其变成线性结构。在电泳过程中,加入SDS的蛋白质样品会带上相同的...
SDSPAGE电泳的原理是什么
形成带负电荷的蛋白质复合物。相关介绍:电泳所产生的复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移 速度取决于分子大小。
sds-page凝胶电泳原理是什么?
SDS-page凝胶电泳是一种利用蛋白质分子量差异进行分离的技术。其基本原理是通过阴离子去污剂SDS(十二烷基硫酸钠)的作用,对蛋白质分子进行变性,使其二级和三级结构被破坏,形成与SDS结合的蛋白-SDS胶束。这种结合使得原本的蛋白质带负电荷显著增加,从而消除不同分子间的电荷和结构差异,使得在电泳过程中...
什么是sds-page凝胶电泳?
sds-page凝胶电泳原理是根据检体中蛋白质分子量大小的不同,使其在电泳胶中分离。SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和...
sds- page是什么意思?
此项技术的原理,是根据检体中蛋白质分子量大小的不同,使其在电泳胶中分离。拓展:SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠–聚丙烯酰胺,sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresis)凝胶电泳是一种可以根据蛋白质的分子量分离样本中蛋白的技术。在电荷的影响下分离大分子称为电泳(electrophoresis)。
sds-page电泳分离蛋白质的原理,这种方法为什么可以测定蛋白质分子量...
因为通过生化方法吧蛋白提取出来,蛋白质带有电荷么,是将混合样品中的蛋白质,其原理是第一向基于蛋白质 PI 不同用等电聚焦,电泳时的正极与负极都会发生电解反应,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。在外电场的作用下,带点颗粒将向着与其电性相反的电极移动,这种现象称为电泳。电泳技术可...
sds-page凝胶电泳原理
SDS-PAGE凝胶电泳是一种强大的蛋白质分离和定量工具,其核心原理在于利用电场作用和SDS(十二烷基磺酸钠)的特性来实现蛋白质的分离。这种凝胶电泳法依赖于聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应,它允许蛋白质按照大小、形状和电荷的不同进行分离。在电场的驱动下,带电的蛋白质分子在凝胶中迁移,迁移速度取决于它们的...