T载体克隆为什么要用cDNA

T载体克隆为什么要用cDNA
T载体可以克隆任何DNA片段。它的目的是后续测序，以便连接到表达载体表达蛋白，所以多数情况下用cDNA。但是也可以基因组测序分析用，扩增16SrRNA就是基因组扩增后T载体克隆测序。。

克隆一个未知的基因拿到序列需要多久?
2 引物合成送到后，使用制备好的脑 cDNA模板利用简并引物进行PCR，然后电泳检测，这个阶段紧凑的话1-2天。3 如果成功克隆出了目的条带，那么就要回收，做TA克隆，然后测序。简并引物克隆出的条带貌似不太适合直接回收测序的。这个过程，片段回收、与T载体连接过夜、连接后转化至感受态细菌、涂板过夜培养...

菌液PCR不同条带
至于说为什么会出现两种克隆，要具体问题具体分析咯。1 可能你的模板有DNA污染，所以同时扩出了DNA的带和cDNA的带；2 你的基因发生了选择性剪接，有多条成熟的mRNA序列；3 该基因有一个家族，而你的两条引物分别在两个保守区；4 引物不特异，或者扩增温度太低。5 你的片断导入到细菌后发生重组了，...

基因克隆的基本步骤有哪些
由于基因组DNA较大，不利于克隆，因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段，常用的方法有机械切割和核酸限制性内切酶消化。若是基因序列已知而且比较小就可用人工化学直接合成。如果基因的两端部分序列已知，根据已知序列设计引物，从基因组DNA 或cDNA中通过PCR技术可以获得目的基因。二、载体的选择：基因克隆...

用m13引物pcr扩增克隆载体,产生多个条带,能够测序吗
cDNA？ 因为一般情况下引物二聚体的条带都是或多或少的存在的。 如果是目的条带有两条，那么可能是引物出现了错配，也有可能是本身就有两种可能。回收测序即可。 追问： 两条带距离很近，一条很亮一条很暗，用的DNA基因组 回答： 基因组DNA的话有杂带几乎不可避免，因为错配可能...

基因原核表达的详细过程
构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】 酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出resistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体...

实验室常用克隆载体和表达载体有哪些?
个用于转化体选择，另一个用于重组子检测。2) 用途: 基因组或cDNA文库的构建;次克隆(subcloning)或限制酶谱分析；外源DNA扩增。例子: pBR322和pUC载体。上述两例中的非重组子来源有两个：a.  酶切反应时仍未被作用的pBR322或pUC18分子 b. 酶切后的载体分子经自我连接又形成载体分子 ...

基因克隆
T\/A克隆是把PCR片段与一个具有3’-T突出的载体DNA连接起来的方法(图15)。使用该方法进行基因克隆时不需要考虑酶切位点问题,但需要选择Taq DNA聚合酶进行PCR扩增,其产物的3’端才会多一个突出的A;此外,T\/A克隆选用商业化的T载体,其为线性化的载体,在3’端有一个突出的T;并且基因片段连入T载体是没有方向性...

DNA绝对定量要怎么进行?
例如pGEM-T载体长3003bp，插入的目的片断长162bp，每个碱基的平均分子量是330，（每对碱基\/bp是660，）质粒原液约250μg\/mL，阿弗加德罗常数（每mol的微粒数）是6.02e+23\/mol。那么每2μl的绝对模板数量是：=14.4e+10所以，10-4~10-7质粒的模板分子数是14.4e+6~3。简单的说：每ul质粒拷贝...

TA克隆的定义是什么?
T-A克隆法就是用改良碱裂解法抽提pBluescript SK(+)质粒，用EcoRⅤ将pBluescript SK(+)质粒切成平端，利用Taq DNA聚合酶及dTTP制备pBluescript SK(+) T-A载体. 将β-actin cDNA片段克隆入自制的pBluescript SK(+) T-A载体，经EcoRⅠ及HindⅢ双酶切得到与设定长度一致的β-actin cDNA片段.对...