用甲醇和醋酸固定下。
其实完全可以染色，也就半小时而已……
在用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量时,应注意哪些问题?_百度...
（9）由于凝胶中含SDS，直接制备干板会产生龟裂现象。如需制干板，则用25%异丙醇内含7%乙酸浸泡，并经常换液，直到SDS脱尽（约需2～3天），才可制备干板。为方便起见，常采用照像法，保存照片。
植物基因工程实验技术-胶回收
很小的DNA 片断常常会用PAGE胶电泳。 PAGE胶好像还没有很好的溶解方法,除了我们前面提到的电洗脱,Qiagen还提供一些私人方法,在应急的时候可以尝试。将切割下来的PAGE条带冲洗后加入指管中,加入2倍体积的分散缓冲液(0.5M醋酸胺、10mM的醋酸镁,1mM EDTA , 0.1% SDS ,pH8.0)50度保温30分钟,离心取上清,避免混入...
超详细蛋白质印迹(Western Blotting,WB)方法介绍
蛋白质上样：温度控制至关重要，务必避免高温，确保上清比例准确，快速加入缓冲液，严格按照指南进行。变性与保存：经过5-10分钟的煮沸，蛋白质得以变性，然后冷藏处理，分装储存，防止反复冻融对蛋白质结构的影响。SDS-PAGE电泳的精密流程：制胶：按照说明精确配制，注意AP与TEMED的添加时机，AP需避光，操作...
蛋白PAGE电泳后,不能及时转膜,能否把胶保存一段时间再转呢?
不能。转膜不及时造成扩散。蛋白在凝胶中是会弥散的，通常都是完成电泳后就尽快转膜，否则弥散后有些实验结果就无法判断了。转膜时的注意事项：1、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加双蒸水定容至1000ml。2、转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、...
请问有谁知道核酸引物和探针PAGE纯化的步骤???
(1)用已制备好的SDS-PAGE分离的蛋白凝胶。(2)用一张滤纸,剪成与胶同样大小,在转移电泳缓冲液中预湿,放在Scotch-Brit Pad上,在胶的阴性端放上滤纸,胶的表面用该缓冲液浸湿,排出所有气泡。(3)在胶的阳极面放置同样大小浸湿的硝酸纤维素膜,排出气泡,再在滤膜的阳极端放置一张滤纸,排出气泡,再放一个Scotch-...
western blotting的原理、操作步骤及意义
也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色,以观察蛋 白的残留情况。 4. 封闭(Blocking) 转膜完毕后,立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中,漂洗1-2分钟,以洗去膜上的转膜液。从转膜完毕后所有的步 骤,一定要注意膜的保湿,避免膜的干燥,否则极易产生较高的背景。 用微型...
Western Blot完整实验流程-从蛋白提取到结果分析。带你玩转WB!_百度知 ...
3. 蛋白质保存 确保蛋白质在实验过程中保持稳定性。4. 蛋白质分离 通过SDS-PAGE凝胶电泳实现按大小分离蛋白质。原理机制 SDS（十二烷基硫酸钠）为阴离子洗涤剂，用于蛋白质变性。它通过疏水基团与蛋白质疏水残基结合，打开蛋白质二硫键，为线性化多肽提供负电荷。蛋白质与SDS复合物形成的负电荷量远大于...
你知道变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的那个胶是怎么配置的?需要哪些必备药品...
（3） 将上述微量离心管插入水漂中，放在电磁炉锅里的沸水中煮3~5min。然后立即插入冰中。（可在-20°C冰柜中保存）。（4） 组装电泳玻璃并用细橡胶管密封底部和侧面然后用夹子夹住（观察教师的演示）。插入梳子后在玻璃上距离梳子齿底部1cm的地方做一个标记。（5） 配制10%分离胶。按顺序和量取...
【Western-blotting】WB实验看过来!纯干货,不忽悠!
蛋白制备时，定量上样是关键，确保各泳道蛋白总量一致。上样前，使用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，以减少降解。蛋白变性后，通过凝胶电泳分离不同大小的蛋白，常用聚丙烯酰胺凝胶，如30% A:B液，以及Tris-甘氨酸或bis-tris缓冲体系。SDS-PAGE是最常见的分离方法，而native-PAGE保持蛋白天然状态，适合特定...
悬赏300分:我想做northern blot,谁帮我设计一下?
SDS-PAGE相关溶液 (1).电极缓冲液：Tris: 6g 甘氨酸： 28.8g (10% )SDS: 10ml 加1000 ml H2O PH:8.3 (2).分离胶buffer: 100ml:Tris:36.6g 1N HCL:(约48ml): PH:8.9 加水至：100ml (3). 浓缩胶buffer: 100ml:Tris: 5.98g 1N HCL:(约48ml): PH:加水...
