第1个回答 2013-11-25
高效液相色谱仪操作步骤：
1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)． 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)． 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)． 设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)． 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)． 填写登记本，由负责人签字。
1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)． 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)． 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)． 设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)． 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)． 填写登记本，由负责人签字。
第2个回答 2013-11-25
高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。
在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。
中国是茶的故乡，制茶、饮茶已有几千年历史，名品荟萃，主要品种有绿茶、红茶、乌龙茶、花茶、白茶、黄茶。茶有健身、治疾之药物疗效，又富欣赏情趣，可陶冶情操。
茶叶的营养价值和药理作用是与它的化学成分分不开的。它的化学组成约有四百多种，其中对人体营养价值与药理作用关系比较密切的是多酚类、生物碱和维生素。
茶多酚类物质是茶叶主要的呈味物质，苦味。茶叶中含量比较高，总量占干茶物质的18％～36％，是茶叶药用价值的最主要的物质基础，具有降血脂、抗肿瘤、抗脂质过氧化、抗菌和抗病毒、调节免疫功能等功效。茶多酚实际上是多种多酚类化合物的总称，其中最重要的是儿茶素类化合物，它占茶多酚总量的50％～70％。
茶叶指纹图谱是利用茶内含物质的秘密、茶树遗传的密码、用图谱的方式来表述具有不同特性的茶叶,可包含种类、产区、树龄、特性、制成品的年份等。本实验用HPLC对茶叶的主要成分进行分离，是建立茶叶指纹图谱的基础。
实验过程中有可能会带入一些杂质，因此实验结束后必须清洗柱子。
三、仪器与试剂
1. 仪器：
Agilent1100 高效液相色谱仪， 50ul微量注射器。
2. 试剂：
（1）甲醇 色谱纯。
（2）乙腈 色谱纯。
（3）甲酸 分析纯。
四、实验步骤
1、色谱条件
色谱柱：色谱柱：XB-Phenyl ,5μm,4.6x150mm
柱温：室温
流动相：乙腈 1%甲酸 /%
检测器：DAD。
检测波长：276nm
进样体积：20�0�8l定量环，实际注射每次可控制在50�0�8l。
梯度洗脱：
2、待测溶液的配制
取两种不同的绿茶，分别标记为绿茶1、绿茶2。各取约0.8000g，用50ml沸水冲泡，分别在10min、30min取上清液，过0.45μm滤头，即得样品1（绿茶1冲泡10min）、样品2（绿茶1冲泡30min）、样品3（绿茶2冲泡10min）、样品4（绿茶2冲泡30min）。
4、色谱测定
(1) 按操作规程开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动Agilent 1100在线工作软件，设定操作条件。流量为1.00ml/min。
(2) 待仪器稳定后，开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置，用微量注射器吸取混合物溶液50ul，注入仪器进样口，顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置，此时显示屏显示进样标志。
(3) 记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积。并将测试报告打印成htm式，以便直接贴到实验报告中。
(4) 实验完毕，清洗系统及色谱柱。本回答被网友采纳
在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。
中国是茶的故乡，制茶、饮茶已有几千年历史，名品荟萃，主要品种有绿茶、红茶、乌龙茶、花茶、白茶、黄茶。茶有健身、治疾之药物疗效，又富欣赏情趣，可陶冶情操。
茶叶的营养价值和药理作用是与它的化学成分分不开的。它的化学组成约有四百多种，其中对人体营养价值与药理作用关系比较密切的是多酚类、生物碱和维生素。
茶多酚类物质是茶叶主要的呈味物质，苦味。茶叶中含量比较高，总量占干茶物质的18％～36％，是茶叶药用价值的最主要的物质基础，具有降血脂、抗肿瘤、抗脂质过氧化、抗菌和抗病毒、调节免疫功能等功效。茶多酚实际上是多种多酚类化合物的总称，其中最重要的是儿茶素类化合物，它占茶多酚总量的50％～70％。
茶叶指纹图谱是利用茶内含物质的秘密、茶树遗传的密码、用图谱的方式来表述具有不同特性的茶叶,可包含种类、产区、树龄、特性、制成品的年份等。本实验用HPLC对茶叶的主要成分进行分离，是建立茶叶指纹图谱的基础。
实验过程中有可能会带入一些杂质，因此实验结束后必须清洗柱子。
三、仪器与试剂
1. 仪器：
Agilent1100 高效液相色谱仪， 50ul微量注射器。
2. 试剂：
（1）甲醇 色谱纯。
（2）乙腈 色谱纯。
（3）甲酸 分析纯。
四、实验步骤
1、色谱条件
色谱柱：色谱柱：XB-Phenyl ,5μm,4.6x150mm
柱温：室温
流动相：乙腈 1%甲酸 /%
检测器：DAD。
检测波长：276nm
进样体积：20�0�8l定量环，实际注射每次可控制在50�0�8l。
梯度洗脱：
2、待测溶液的配制
取两种不同的绿茶，分别标记为绿茶1、绿茶2。各取约0.8000g，用50ml沸水冲泡，分别在10min、30min取上清液，过0.45μm滤头，即得样品1（绿茶1冲泡10min）、样品2（绿茶1冲泡30min）、样品3（绿茶2冲泡10min）、样品4（绿茶2冲泡30min）。
4、色谱测定
(1) 按操作规程开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动Agilent 1100在线工作软件，设定操作条件。流量为1.00ml/min。
(2) 待仪器稳定后，开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置，用微量注射器吸取混合物溶液50ul，注入仪器进样口，顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置，此时显示屏显示进样标志。
(3) 记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积。并将测试报告打印成htm式，以便直接贴到实验报告中。
(4) 实验完毕，清洗系统及色谱柱。本回答被网友采纳
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