请教一个Overlapping PCR方面的问题
1. 我试过增加重叠区域的长度，但结果看起来却不尽然，80bp的重叠区域比200bp的扩增效果要好一些。我想原因有可能是重叠区域太长，可能会引起更多非特异的退火。2. 通过改变热循环，能够起到些许作用。我的做法是先在50-60C扩增10次，延伸时间设为AC及BD的延伸时间；接下来将退火温度直接升至72C，用...
用重叠延伸PCR连接片段为什么不出目的条带?
因为概率太低了,建议你程序先设置成五个循环94,68,72,时间自定,然后再接正常的PCR循环30个overlapping有好多种做法呢，你试试看不用取出反应液的办法吧，就是我回答里的那五个循环 首先 ，配置体系，酶和引物都加，然后，把第一步所得的三条片段尽量等浓度混合，量大一些，当做模板。 然后，设置...
何为overlapping PCR,复式PCR
overlap就是搭桥PCR～两段片段互为引物进行PCR～跟引物二聚体形成的原理差不多～
关于重叠PCR加的那20bp,求大虾解答!在线等!
我一般用目的序列A下游12个，加上目的序列B上游12个，写在一起作为中间那对儿引物，这两条引物即Ar和Bf，是完全互补的两条链，而Af和Br就是普通的PCR引物。使用的时候，AfAr是一个体系，BfBr是一个体系，先扩增出上下游产物 之后将上下游产物回收，放一起，只加Af和Br扩增。此时，中间那对儿over...
如何用PCR进行序列的交换
Action→In-fusion cloning→insert fragment 在Vector中选中你要替换的序列 在fragment中选择你要替换成的序列 点product中右上角的choose overlapping PCR primer→点右下角的clone
primer6.0设计引物-如何应用primerprimer6.0设计引物
如果实在不行的话楼主也可以考虑做overlappingPCR,把片段分为2-3个部分来P,不过这样工作量就会大不少。希望能够帮到你~有问题一起讨论解决哦~如何应用primerprimer6.0设计引物 引物设计有3条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在...
测序相关知识总结
高通量测序技术(High-throughput sequencing,HTS)是对传统Sanger测序(称为一代测序技术)革命性的改变,一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定, 因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing,NGS )足见其划时代的改变, 同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为...
pet28a作载体的重组质粒转入大肠杆菌怎么检测筛选,酶切位点是NdeI和Xho...
我晕，AMP是可以插入的，方法有很多，比如酶切，比如overlapping PCR，不过还是建议用卡那霉素筛选，蓝白斑也可以的。有lacI可以弄蓝白斑的。不过筛选出来的单克隆还是要酶切鉴定的哦~或者去送测个序列~保证是你要的而不是空载体
premier primer6.0产物长度为9000多的引物怎么设计呀?
另外最长能够P出20kb的序列。当然这是在非常好的情况下。同时也可以在反应体系中添加2-5%的DMSO，这样可以帮助扩增。如果实在不行的话楼主也可以考虑做overlapping PCR，把片段分为2-3个部分来P，不过这样工作量就会大不少。希望能够帮到你~有问题一起讨论解决哦~
现在有哪几种PCR的方法啊?
一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR,又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同.免疫PCR 免疫试验的主要步骤有三个:①抗原抗体反应,②与嵌合连接分子结...
