RNAæåæ¥éª¤å注æäºé¡¹ï¼ä» ä¾åèï¼ï¼
å®éªæ¥éª¤å¦ä¸ï¼
1.å50â100mgçç»ç»,å å ¥1ml Trizolè¯åï¼ç¨åæµå¨æå(Trizolå æ¾äºå°ä¸)ã
2.å°åæµå®¤æ¸©æ¾ç½®5minã
3.å å ¥200μl氯仿,å§çéè¡æ··å30sï¼å°ä¸éç½®3minã
4.12000rpmï¼4â离å¿15minã
5.å°ä¸æ¸ 液å°å¿è½¬ç§»å°æ°ç1.5ml离å¿ç®¡ä¸ï¼å400μlï¼ï¼å å ¥çéä½ç§¯çå¼ä¸éï¼ä¸ä¸é¢ åå 次混åï¼å®¤æ¸©ä¸æ¾ç½®15minãï¼æ¤æ¥ä¸æ³¨æï¼ä¸è¦å¸åä»»ä½ä¸é´å±ç©è´¨ï¼å®ç¼ºå¿çãï¼
6.12000rpmï¼4â离å¿15minã
7.å°å¿ç§»å»ä¸æ¸ 液ï¼é²æ¢RNAæ²æ·ä¸¢å¤±ã
8.ç¨70%ä¹éï¼DEPCå¤ççæ°´é å¶ï¼æ´æ¶¤1次ï¼å å ¥700μlä¹éï¼å°RNAæ²æ·å¼¹èµ·ï¼æ¼æ´ãï¼æ¤æ¶RNAæ¯ä¸æº¶è§£çï¼
9.8000rpmï¼å®¤æ¸©ç¦»å¿10minã
10.å°½å¯è½å½»åºå°å¸èµ°ä¸æ¸ ï¼é²æ¢RNAæ²æ·ä¸¢å¤±ã
11.ç空离å¿å¹²ç¥3â5åéï¼ææ¾å¨å®¤æ¸©ä¸ä½¿ä¹éå®å ¨æ¥åæã
12.æ²æ·ç¨30μl DEPC-H2O溶解ãå¦åç°æ²æ·é¾æº¶ï¼68âå¤ç10minã
13.RNAæ£æµ
(1)æµå®æ ·åå¨260nmå280nmçå¸å å¼æ1OD=40μg/ml RNA计ç®RNAç产éã
OD260/OD280å¨1.8-2.0ã
(2)è¿è¡ç²éåæ§ç¼èç³åè¶çµæ³³,ç¡®å®RNAçå®æ´æ§å污ææ åµã
注æäºé¡¹ï¼
1.è·å¾RNAæçä½æä¸ä¸åå
a:æ ·åè£è§£æåæµå¤çä¸å½»åº
b:æåå¾å°å°RNAæ²æ·æªå®å ¨æº¶è§£
2.A260/A280ï¼1.65åå
a:æ£æµå¸å 度æ¶ï¼RNAæ ·åä¸æ¯æº¶äºTEï¼èæ¯æº¶äºæ°´ãä½ç¦»åæµåº¦åä½PHæ¡ä»¶ä¸ï¼A280å¼ä¼è¾é«
b:æ ·ååæµæ¶å å°è¯åé太å°
c:åæµåæ ·åæªå¨å®¤æ¸©æ¾ç½®2åé
d:æ°´ç¸ä¸æ··æææºç¸
e:æåå¾å°å°RNAæ²æ·æªå®å ¨æº¶è§£
3.RNAé解åå
a:ç»ç»ååºå没æ马ä¸å¤çæå·å»
b:æ ·åææåå°RNAæ²æ·ä¿åäº-5--20度ï¼æªå¨-60--70度ä¿å
c:ç»èå¨è°é ¶å¤çæ¶è¢«ç ´å
d:溶液æ离å¿ç®¡æªç»RBaseå»å¤ç