最近在做菌体全蛋白的电泳分析,前段时间做胶都好好的,现在灌浓缩胶后,梳子那个本来是方方正正的柱子,但是凝了之后就崩掉一点了,有些缺角,有些干脆缩了一点,说是水蒸发也没那么快啊,半个钟后就发现是这样了,郁闷........... AP 丙烯酰胺 tris-cl 都是新配的,TEMED 就有些天了,但是都在4度冰箱冻着的
垂直平板的电泳,梳子没拔就发现是这样了,求教各位大侠
做蛋白质的sdspage电泳为什么脱完色没有条带
染色后,还需要脱色液(有乙醇、醋酸)脱色,不脱色的话全是蓝色,不能区分条带。脱色后,条带才能显示出来。在跑SDS-PAGE时,需要点Marker,正常情况在染色、脱色后能至少看到Marker的条带。如果Marker都没有,那就是电泳问题了。蛋白浓度不够、跑胶的时间过长或过短、仪器问题、正负极不要插反。
聚丙烯酰氨凝胶电泳常见问题
在SDS-PAGE电泳过程中,配胶缓冲液系统的选择至关重要。浓缩胶采用pH6.7的Tris-HCL缓冲,甘氨酸在此环境下泳动效率低,而氯离子浓度高,形成导电性较低的区带。分离胶的pH8.9使得甘氨酸解离增加,蛋白分子根据电荷和分子大小进行分离。因此,pH对电泳结果影响显著,实验中遇到问题时,应首先考虑这一因...
sds-page检测目的蛋白质,电泳结果如何?
SDS-Page电泳通过聚丙烯酰胺分子筛效应分离蛋白质与核酸,其中SDS-PAGE技术特别适用于蛋白质亚基分子量大小的分离。几乎所有蛋白质电泳分析均在聚丙烯酰胺凝胶上进行,确保蛋白质解离为单个多肽亚基,减少聚集。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中,十二烷基硫酸钠(SDS)与变性多肽结合,赋予蛋白负电荷。多肽与SDS结合量...
请教sds-page高手
3)非还原SDS处理:生理体液、血清、尿素等样品,一般只用1%SDS沸水中煮3min,未加还原剂,因而蛋白折叠未被破坏,不可作为测定分子量来使用。⒊ SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用?聚丙烯酰胺的作用:丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否,与促凝剂及环境密切相关;制...
sdspage电泳胶一半跑不下去
SDS-PAGE电泳胶一半跑不下去可能是以下原因:1. 样品没有处理好,需要重新处理。2. 缓冲液不新鲜,需要更换新的缓冲液。3. 电压过高或过低,需要调整电压。4. 电泳温度过高或过低,需要调整电泳温度。5. 电泳时间过长或过短,需要调整电泳时间。6. 凝胶配制时没有混合均匀或胶中有气泡,需要重新配制...
SDSPAGE电泳为什么会跑歪
在确定的条件下,带电粒子在单位电场强度作用下,单位时间内移动的距离即迁移率为常数,是该带电粒子的物化特征性常数。不同带电粒子因所带电荷不同,或虽所带电荷相同但荷质比不同,在同一电场中电泳,经一定时间后,由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。
SDS-PAGE凝胶电泳的实验技巧+经验问答+操作SOP
在电泳操作中,如电压过高电流低、胶板问题等,都需检查设备装配和操作方法。确保凝胶浓度、电压设置和电泳槽清洁是关键。总之,SDS-PAGE电泳实验包括精确的凝胶配置、样品处理、电泳条件控制以及问题排查。遵循正确的步骤和注意事项,才能获得高质量的电泳结果。实验用品:蛋白样品、SDS-PAGE缓冲液、各种溶液、...
SDSPAGE电泳的原理是什么
形成带负电荷的蛋白质复合物。相关介绍:电泳所产生的复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移 速度取决于分子大小。
双向电泳第二步SDS-PAGE跑胶的问题
1, 提取蛋白的时候要充分超声粉碎,然后高速离心。吸取上清的时候不要触到沉淀。污染不一定是RNA和DNA,还有可能是胶里面有杂质。2. 遇热膨胀过度,你可以在电泳槽里面安放冰槽,电泳液预先降温,同时降低电泳时的电流。还有配琼脂也要用缓冲液,而不是水,不然不导电。 接触不好也会引起条带变形 ...
SDS-PAGE电泳求助专题
SDS-PAGE电泳是实验室比较常用的一个实验,关于SDS-PAGE电泳的一些代表性问题,现集中整理一下以供大家参考指正。聚丙烯酰胺凝胶 聚丙烯酰胺凝胶,是由丙烯酰胺单体(Acr)和少量的交联剂N,Nˊ-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂(过硫酸胺或核黄素)和加速剂(N, N,NˊNˊ-四甲基乙二胺)的作用...